枸杞子（wolfberry，RW）為茄科枸杞子屬綠色植物，是國內傳統(tǒng)式名貴中藥，從古至今一直把它做為滋補養(yǎng)生佳品，關鍵包含靈芝多糖，胡羅卜素等各種活力成份?！侗静菥V目》中記述枸杞子“久服堅骨筋，益身青春不老，耐暑寒”。枸杞子性甘辛平，現代科學研究表明，枸杞子具備滋養(yǎng)腎臟、益腎清目、防衰老等諸多作用。

變老是一種由各種要素造成的細微而又繁雜的生理現象，一般隨著著生理作用的衰退乃至衰退，根據變老的自由基學說，變老與人體細胞的空氣氧化損害緊密聯(lián)系。枸杞子做為自然的抗氧劑，其清除自由基和延緩衰老作用獲得了普遍的關心。近些年，枸杞子功能食品的分析和研發(fā)愈來愈深
入，尤其是枸杞子做為抗氧化食品的開發(fā)設計，已變成枸杞子制造業(yè)科學研究的網絡熱點。

美拉德反應是一種在糧食加工環(huán)節(jié)中普遍出現的非酶褐變反映，關鍵就是指還原性糖與碳水化合物、蛋白相互之間的繁雜反映。美拉德反應除開能改進食品類感觀質量，如顏色和口味外，研究表明，美拉德反應物質中的類黑精具備一定的抗氧化性特點，這為找尋和運用純天然抗氧劑給予了新的構思。

雖然枸杞子和美拉德反應物質均有清除自由基功效，且具有一定的理論基礎，但二者相結合后的物質是不是會出現更強的實際效果，現階段仍末見報導。因此 ，本試驗選用美拉德反應基本原理，制取一種褐變野生黑枸杞新品，以黑腹家蠅為研究目標，深層次研究褐變野生黑枸杞（brownblackwolfberry，BBW）的抗氧化性功效，進而為美拉德反應物質在功能性食品行業(yè)的使用給予理論來源。

一、原材料與方式

1、原材料與儀器設備

枸杞子由甘肅早康高新科技有限責任公司給予，黑腹家蠅，由天津市科技學院食品科學與工程學校食用添加劑與功能性調料試驗室給予；玉米面粉、發(fā)酵粉，購自天津濱海新區(qū)明耀商場；無水葡萄糖、瓊脂粉，購于天津市春江化工廠有限責任公司；對甲基苯甲酸乙酯，購于北京市鼎國興盛生物科技企業(yè)；沒食子酸、蘆丁、福林酚試劑，購于北京索萊寶微生物有限責任公司；過氧化氫酶（CAT）檢測試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）檢測試劑盒（測分析）、考馬斯亮藍檢測試劑盒、丙二醛（MDA）檢測試劑盒，購于南京建成生物技術研究室。

HWS-850智能化恒溫恒濕設備恒溫箱，寧波海曙賽福試驗儀器廠；MultiskanFC酶標儀，英國ThermoFisher企業(yè)；UVmini-1240紫外線/由此可見光度計，日本安捷倫儀器分析儀器公司；MyiQ2即時定量PCR儀，英國Bio-Rad公司；冷凍離心機，英國Thermo企業(yè)。

2、實驗方法：

（1）褐變野生黑枸杞的制取

以寧夏枸杞為原材料，在75%空氣濕度和700C標準下置放6d，再在450C的風機烘干箱中干躁定形。干躁風力0.5m/s，干躁時間60min就可以。獲得的褐變野生黑枸杞在溫開水中泡浸、磨漿、離心式、取上清液，濃縮預留。

（2）褐變野生黑枸杞中黃酮類物質、總酚和褐變指數值的測量

黃酮類類物質的測量參考SZDB/Z349–2019《黃酮類化合物的測定》中紫外線分光儀深度廣度法；花青素的測量選用福林酚法；褐變指數值的測量參考Xia等的方式 ，從褐變野生黑枸杞和紅枸杞中獲取相對分子質量（＞10kDa）的蛋白質黑色素，在420nm處測定的OD值做為OD值。

（3）褐變野生黑枸杞中關鍵酚類物質的測量

選用高效液相色譜色譜分析。檢驗標準：離子交換柱：C18（250mm×4.6mm，5μm，）；流動性相A：2%苯甲酸；流動性相B：乙腈；柱溫35～40C；進樣量20uL；流動速度：0.8mL/min；檢驗光波長：280nm；探測器為SPD紫外線探測器，用前過0.45μm膜，減壓蒸餾，過柱程序流程如表1所顯示。

（4）家蠅的塑造

基本培養(yǎng)液：玉米面粉72g，無水葡萄糖72g，瓊脂粉6g，發(fā)酵粉10g，40mL添加劑（1%對甲基苯甲酸乙酯的75%乙醇溶液），750mL純凈水。給藥培養(yǎng)液：在基本培養(yǎng)液基本上各自依照終濃度值3mg/mL、12mg/mL加上相對應使用量的褐變野生黑枸杞和紅枸杞。

（5）家蠅使用壽命試驗

搜集2d齡的雄、雌蟲家蠅各1000只，均值分成5組，各自塑造在帶有0、3、12mg/mL褐變野生黑枸杞和紅枸杞的培養(yǎng)液內，每一組10管，每管20只，給藥使用量的挑選參考劉亞荷等科學研究結果，在反復測試的根基上最后明確。在250⁰C、空氣濕度50%的恒溫恒濕設備恒溫箱中塑造。試驗操作過程中，每3d拆換新的培養(yǎng)液，與此同時觀查家蠅存活，情況并紀錄，直到家蠅所有身亡，并反復試驗。最終統(tǒng)計分析家蠅的人均壽命、過半數身亡使用壽命和最大使用壽命（每組最終20只身亡家蠅的日數平均值）。

（6）家蠅亞急性試驗

搜集2d齡雄、雌蟲家蠅各1000只，每一組200只，選用高效液相色譜色譜分析。檢驗標準：離子交換柱：C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動性相A：2%苯甲酸；流動性相B：乙腈；柱溫35～40⁰C；進樣量20uL；流動速度：0.8mL/min；檢驗光波長：280nm；探測器為SPD紫外線探測器，用前過0.45μm膜，減壓蒸餾，塑造25d后，挨餓2h，CO2麻醉劑后導進無培養(yǎng)液的整潔家蠅試管嬰兒中，將沾有含30%H2O2的6%葡萄糖水溶液的過濾紙條放進試管嬰兒，確保過濾紙條所有侵潤但不可能有液態(tài)流下來，每2h紀錄家蠅死亡率，直到家蠅所有身亡。

（7）家蠅抗抗霉素活測量

搜集2d齡的雌、男性家蠅各1000只，每一組200只，選用高效液相色譜色譜分析。檢驗標準：離子交換柱：C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動性相A：2%苯甲酸；流動性相B：乙腈；柱溫35～40⁰C；進樣量20uL；流動速度：0.8mL/min；檢驗光波長：280nm；探測器為SPD紫外線探測器，用前過0.45μm膜，減壓蒸餾，塑造45d后，禁2h，CO2麻醉劑后秤重，-800C預留。家蠅和鹽水1∶49（m/m）冰面勻漿，4⁰C，2500r/min離心式，搜集上清液測量蛋白質濃度值，T-SOD、CAT魅力及MDA成分。