1.2.3前解決

稱量試品(肝部、腎臟功能、全身肌肉)2g(精準(zhǔn)至0.01g)于50mL聚丙稀離心管架中，添加混和放射性核素內(nèi)標(biāo)切削液100μL，冉添加2mL水，渦流混和1min。添加0.2％硫酸-乙腈水溶液10mL，200r/min震蕩10min，添加2g氧化鈉，再震蕩10min，5000r/min離心式5min。將所有上清液遷移至15mL聚丙稀離心管架并40℃氮吹至約5mL，添加100mgPSA、80mgC₁₈、30mgGCB，渦流混和1min，震蕩10min，5000r/min離心式10min。取所有上清液至另一個(gè)15mL聚丙稀離心管架中，40℃氮吹至近干，1mL工業(yè)甲醇滴定劑，15000r/min離心式5min，上清液供上機(jī)操作測(cè)量。

為降低試驗(yàn)操作過(guò)程中產(chǎn)生的環(huán)境污染及環(huán)境影響，全過(guò)程盡量減少應(yīng)用聚四氟乙烯容器而應(yīng)用聚丙稀材料容器。

1.3方法學(xué)調(diào)查

1.3.1基質(zhì)效應(yīng)

本試驗(yàn)選用規(guī)范工作中溶液的配制：精確移取13種PFCs混和規(guī)范切削液、混和放射性核素內(nèi)標(biāo)切削液適當(dāng)，用工業(yè)甲醇配置含量為0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10ng/mL(放射性核素內(nèi)標(biāo)MPFOA濃度值為1.5ng/mL、MPFOS濃度值為3.0ng/mL)的全系列規(guī)范工作中水溶液。MPFOA是定量分析9種PFCAs的放射性核素內(nèi)標(biāo)，MPFOS是定量分析4種PFSAs的放射性核素內(nèi)標(biāo)配置的全系列規(guī)范工作中水溶液，依照規(guī)范工作中溶液的配制：精確移取13種PFCs混和規(guī)范切削液、混和放射性核素內(nèi)標(biāo)切削液適當(dāng)，用工業(yè)甲醇配置含量為0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10ng/mL(放射性核素內(nèi)標(biāo)MPFOA濃度值為1.5ng/mL、MPFOS濃度值為3.0ng/mL)的全系列規(guī)范工作中水溶液。MPFOA是定量分析9種PFCAs的放射性核素內(nèi)標(biāo)，MPFOS是定量分析4種PFSAs的放射性核素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量，制作標(biāo)曲。與此同時(shí)，選擇9種空缺試品栽培基質(zhì)(生豬肉、牛肝、豬腰子、牛羊肉、豬肝、牛腎、牛肉、羊肝、羊腰)不用放射性核素內(nèi)標(biāo)依照稱量試品(肝部、腎臟功能、全身肌肉)2g(精準(zhǔn)至0.01g)于50mL聚丙稀離心管架中，添加混和放射性核素內(nèi)標(biāo)切削液100μL，冉添加2mL水，渦流混和1min。添加0.2％硫酸-乙腈水溶液10mL，200r/min震蕩10min，添加2g氧化鈉，再震蕩10min，5000r/min離心式5min。將所有上清液遷移至15mL聚丙稀離心管架并40℃氮吹至約5mL，添加100mgPSA、80mgC₁₈、30mgGCB，渦流混和1min，震蕩10min，5000r/min離心式10min。取所有上清液至另一個(gè)15mL聚丙稀離心管架中，40℃氮吹至近干，1mL工業(yè)甲醇滴定劑，15000r/min離心式5min，上清液供上機(jī)操作測(cè)量。

選用空缺栽培基質(zhì)水溶液做為有機(jī)溶劑配置同樣濃度值標(biāo)準(zhǔn)的系列產(chǎn)品栽培基質(zhì)規(guī)范工作中水溶液，依照離子交換柱：AtlantisT3離子交換柱(2.1mmx150mm，3μm)；流動(dòng)速度：0.3mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；流動(dòng)性相：2.5mmol/L乙酸銨-甲醇溶液(A)(2.5mmol/L乙酸銨水溶液(B)；梯度方向過(guò)柱程序流程：0～3min，90％～40％B；3～12min，40％～10％B；12～14min，10％B；14～14.5min，10％-90％B；14.5～18min，90％B制作標(biāo)曲。根據(jù)較為栽培基質(zhì)標(biāo)曲與有機(jī)溶劑規(guī)范曲線方程切線斜率的比率來(lái)分辨基質(zhì)效應(yīng)的危害。

1.3.2線形范同、方法檢出限、定量限

0.05、0.1、0.5、l、2、5、10ng/mL系列產(chǎn)品規(guī)范工作中水溶液依照離子交換柱：AtlantisT3離子交換柱(2.1mmx150mm，3μm)；流動(dòng)速度：0.3mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；流動(dòng)性相：2.5mmol/L乙酸銨-甲醇溶液(A)(2.5mmol/L乙酸銨水溶液(B)；梯度方向過(guò)柱程序流程：0～3min，90％～40％B；3～12min，40％～10％B；12～14min，10％B；14～14.5min，10％-90％B；14.5～18min，90％B。電噴霧器離子源(ESI)；掃描儀方法：空氣負(fù)離子掃描儀；檢驗(yàn)方法：多反映檢測(cè)(MRM)；噴霧器工作電壓：3500V；蒸汽溫度；290℃；正離子傳送管溫度：270℃；鞘氣流動(dòng)速度：30arb；輔助氣流動(dòng)速度：10arb；二級(jí)撞擊氣：氬氣；撞擊氣工作壓力：1.5mTorr標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量，放射性核素內(nèi)標(biāo)法定量分析，以每個(gè)總體目標(biāo)物與相應(yīng)的放射性核素內(nèi)標(biāo)物的峰斷積比率為縱軸、以各總體目標(biāo)物濃度值與與相應(yīng)的放射性核素內(nèi)標(biāo)物的濃度值比率為橫坐標(biāo)軸，求線性方程及相關(guān)系數(shù)r。依照GB/T27417-2017《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》中5.4條文要求，在豬、牛、羊的肝部、腎臟功能、全身肌肉空缺試品栽培基質(zhì)中加上預(yù)計(jì)最少可接納濃度值0.15μg/kg，每一個(gè)試品平行測(cè)定10次，測(cè)算方法檢出限(LOD)=0 3SD、方式定量限(LOQ)=0 10SD。

1.3.3利用率和精度

依照GB/T27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢驗(yàn)要求》，針對(duì)未制訂MRL限定的化學(xué)物質(zhì)，利用率試驗(yàn)應(yīng)在方式測(cè)量下限、普遍限定指標(biāo)值、一個(gè)科學(xué)合理的加上濃度值三個(gè)水準(zhǔn)開(kāi)展。本試驗(yàn)選用在牛肝、豬肝、羊肝、豬腰子、牛腎、羊。腎、生豬肉、牛羊肉、牛肉9個(gè)不一樣栽培基質(zhì)空缺試品中加上0.2、1和2μg/kg三個(gè)濃度值，每一個(gè)濃度值6個(gè)平行面，稱量試品(肝部、腎臟功能、全身肌肉)2g(精準(zhǔn)至0.01g)于50mL聚丙稀離心管架中，添加混和放射性核素內(nèi)標(biāo)切削液100μL，冉添加2mL水，渦流混和1min。添加0.2％硫酸-乙腈水溶液10mL，200r/min震蕩10min，添加2g氧化鈉，再震蕩10min，5000r/min離心式5min。將所有上清液遷移至15mL聚丙稀離心管架并40℃氮吹至約5mL，添加100mgPSA、80mgC18、30mgGCB，渦流混和1min，震蕩10min，5000r/min離心式10min。取所有上清液至另一個(gè)15mL聚丙稀離心管架中，40℃氮吹至近干，1mL工業(yè)甲醇滴定劑，15000r/min離心式5min，上清液供上機(jī)操作測(cè)量。離子交換柱：AtlantisT3離子交換柱(2.1mmx150mm，3μm)；流動(dòng)速度：0.3mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；流動(dòng)性相：2.5mmol/L乙酸銨-甲醇溶液(A)(2.5mmol/L乙酸銨水溶液(B)；梯度方向過(guò)柱程序流程：0～3min，90％～40％B；3～12min，40％～10％B；12～14min，10％B；14～14.5min，10％-90％B；14.5～18min，90％B。電噴霧器離子源(ESI)；掃描儀方法：空氣負(fù)離子掃描儀；檢驗(yàn)方法：多反映檢測(cè)(MRM)；噴霧器工作電壓：3500V；蒸汽溫度；290℃C；正離子傳送管溫度：270℃；鞘氣流動(dòng)速度：30arb；輔助氣流動(dòng)速度：10arb；二級(jí)撞擊氣：氬氣；撞擊氣工作壓力：1.5mTorr；與此同時(shí)做空缺試驗(yàn)，均扣減本底值后測(cè)算同成品率及精度。

1.4數(shù)據(jù)處理方法

選用英國(guó)ThermoFisherScientific公司Xcalibur3.0手機(jī)軟件、Origin8.0版本號(hào)開(kāi)展數(shù)據(jù)處理方法。

2.結(jié)果與剖析

2.1色譜儀和質(zhì)譜分析標(biāo)準(zhǔn)提升

2.1.1色譜儀標(biāo)準(zhǔn)提升

PFCs具備吸水性和疏水性及其一定的兩性離子和正負(fù)極，有關(guān)規(guī)范及參考文獻(xiàn)大部分采川較低硅甲基活力填充料的C18液相色譜儀柱分離出來(lái)、乙腈-乙酸銨溶液或工業(yè)甲醇-乙酸銨溶液流動(dòng)性相梯度方向過(guò)柱，來(lái)完成這類物質(zhì)的優(yōu)良分離出來(lái)。本試驗(yàn)關(guān)鍵調(diào)查二種流動(dòng)性相管理體系乙腈-乙酸銨溶液、工業(yè)甲醇-乙酸銨溶液對(duì)PFCs及放射性核素內(nèi)標(biāo)底敏感度差別。根據(jù)較為同樣濃度值標(biāo)液峰而積(見(jiàn)圖1)發(fā)覺(jué)，二種流動(dòng)性相梯度方向過(guò)柱標(biāo)準(zhǔn)下，15種化學(xué)物質(zhì)峰形均銳利對(duì)稱性。與乙腈-乙酸銨溶液流動(dòng)性相對(duì)比，以工業(yè)甲醇-乙酸銨溶液為流動(dòng)性相時(shí)，除PFBA峰總面積降低29％以外，別的14種化學(xué)物質(zhì)的色潛紛紛總面積提高了22％～151％。因此 ，本試驗(yàn)挑選峰而積比較大、敏感度較高的工業(yè)甲醇-乙酸銨溶液做為流動(dòng)性相管理體系。

13種PFCs及2種放射性核素內(nèi)標(biāo)物為羧基或磺酸鹽，在流動(dòng)性看中添加乙酸銨，能使水溶液維持一定的pH及電離度，能夠合理地提高電噴霧器離子化響應(yīng)值，并降低有機(jī)溶劑效用，改進(jìn)峰形。但也是有研究表明，較濃度較高的的乙酸銨對(duì)質(zhì)譜檢測(cè)有極強(qiáng)的抑制效果。規(guī)范及參考文獻(xiàn)中常用的乙酸銨濃度值為1～10mmol/L，本試驗(yàn)以工業(yè)甲醇和水為有機(jī)溶劑，各自配置同樣濃度值的乙酸銨甲醇溶液及乙酸銨溶液。根據(jù)較為1、2.5、5、10mmol/L四個(gè)不一樣濃度值情況下的檢測(cè)結(jié)果(見(jiàn)圖2)能夠 看得出，PFOS和PFDoA在1、2.5mmol/L濃度值的峰總面積較高且基本上相同，其他13種化學(xué)物質(zhì)均在乙酸銨濃度值為2.5mmol/L時(shí)，色譜儀峰總面積做到最高值。