④根據(jù)100～1000uL量程的移液器檢定報告，移取800uL液體的誤差為士0.5%，則相對不確定度為：

綜上計(jì)算，在樣品的前處理過程中，由于移取試劑引入的不確定度為：

4.2.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度引入的不確定度

本實(shí)驗(yàn)中所用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品，分析不確定度時選取C16∶0棕櫚酸進(jìn)行計(jì)算。由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書信息可知混標(biāo)中棕櫚酸甲酯的純度為99.90%，則由標(biāo)準(zhǔn)品純度引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度和相對不確定度分別為：

4.2.4 方法重復(fù)性引入的不確定度

分別取6份鮮馬奶樣品進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)，測定其棕櫚酸的含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2。

計(jì)算棕櫚酸含量的平均值，并依據(jù)貝塞爾公式計(jì)算出棕櫚酸含量的標(biāo)準(zhǔn)偏差S：

式中x為脂肪酸的含量，n為實(shí)驗(yàn)的次數(shù)。根據(jù)不確定度的A類評定標(biāo)準(zhǔn)，對于經(jīng)過平均的結(jié)果，平均值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度采用平均值的標(biāo)準(zhǔn)差：
 

計(jì)算可知，6次測定鮮馬奶中脂肪酸含量的標(biāo)準(zhǔn)偏差S（rep）=0.361g/100g；測定方法重復(fù)性的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為u（rep）=0.147g/100g；故測定鮮馬奶中的棕櫚酸時，由方法重復(fù)性引入的不確定度為0.225%。

4.2.5 方法回收率引入的不確定度

在評定測定鮮馬奶中脂肪酸的不確定度時，通過進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)來探究方法回收率引入的不確定度。選取脂肪酸譜圖中最具顯著性的脂肪酸C16∶0棕櫚酸做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，所得數(shù)據(jù)如表3。

計(jì)算加標(biāo)回收率的平均值，并依據(jù)貝塞爾公式計(jì)算出加標(biāo)回收率的標(biāo)準(zhǔn)偏差S，根據(jù)不確定度的A類評定標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算回收率的標(biāo)準(zhǔn)不確定度，進(jìn)而得出相對不確定度，計(jì)算方法與4.2.4中相似。

計(jì)算可知，測定鮮馬奶中棕櫚酸的加標(biāo)回收率的標(biāo)準(zhǔn)偏差S（R）=2.40%；標(biāo)準(zhǔn)不確定度為u（R）=0.980%；進(jìn)一步計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（R）=0.996%。故測定鮮馬奶中的棕櫚酸時，方法回收率引入的不確定度為0.996%。

4.3 合成不確定度的計(jì)算

綜合各分量不確定度的結(jié)果，根據(jù)下式計(jì)算測定鮮馬奶中脂肪酸的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

4.4 擴(kuò)展不確定度的計(jì)算

參照標(biāo)準(zhǔn)JJF1059.1-2012測量不確定度評定與表示[24]，對于大多數(shù)測定不確定度的評定，按正態(tài)分布取置信水平95%，k=2。實(shí)驗(yàn)采用氣相色譜法測定鮮馬奶中脂肪酸的含量，并選取C16：0棕櫚酸為標(biāo)志性脂肪酸計(jì)算了不確定度。按擴(kuò)展不確定度計(jì)算公式：U=k×uc，計(jì)算得到脂肪酸的擴(kuò)展不確定度為：U（C16∶0）=2.42mg/100g。

綜上，對于本次實(shí)驗(yàn)的鮮馬奶樣品，其中棕櫚酸的含量可表示為：（65.4±2.42）mg/100g，k=2，p=95%。

5 結(jié)論

將鮮馬奶樣品甲酯化后經(jīng)氣相色譜法測定其中的脂肪酸含量，結(jié)果表明鮮馬奶中脂肪酸組成較為豐富，具有獨(dú)特的營養(yǎng)價值。選取含量較高的棕櫚酸C16∶0對該實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證，可知棕櫚酸甲酯在50.75～1015μg/mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系；同一樣品的實(shí)驗(yàn)重復(fù)性較好，符合常規(guī)實(shí)驗(yàn)精密度的要求；選取線性范圍的最低點(diǎn)50.75μg/mL加標(biāo)時信噪比符合常規(guī)實(shí)驗(yàn)的檢出限，可初步作為實(shí)驗(yàn)方法的檢出限參考值；在線性范圍內(nèi)加標(biāo)，驗(yàn)證可知方法的回收率在94.58%～102.1%之間。

評定方法的不確定度時，根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作和結(jié)果計(jì)算分析得出稱取樣品誤差m、移取試劑體積誤差V、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度誤差P、方法重復(fù)性誤差rep、方法回收率誤差R的不確定度分量分別為：0.000576%、1.55%、0.0578%、0.225%、0.996%。顯然，稱取樣品引入的不確定度對總的不確定貢獻(xiàn)基本可以忽略不計(jì)，說明采用該精度的天平足以達(dá)到要求；方法重復(fù)性引入的不確定度也較小，證明該方法復(fù)現(xiàn)性較強(qiáng)；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度在實(shí)驗(yàn)中需納入計(jì)算范圍，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性；移取試劑體積和方法回收率引入的不確定度相對重要，在實(shí)際的實(shí)驗(yàn)操作中需要從人為和儀器容器因素多方面保證精確度；每次實(shí)驗(yàn)時同時做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

此外，在本文中為方便計(jì)算和討論，只選取了棕櫚酸C16∶0為例進(jìn)行分析。如需進(jìn)一步驗(yàn)證氣相色譜法測定其他脂肪酸的含量及不確定度時，可依照此方法增加相應(yīng)的內(nèi)容。

聲明：本文所用圖片、文字來源《中國食品添加劑》，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請與本網(wǎng)聯(lián)系

相關(guān)鏈接：棕櫚酸甲酯，棕櫚酸，脂肪酸