5、顯色反應(yīng)時(shí)間危害

取50ml容量瓶一只，添加CAT樣液(酶促反應(yīng)低于2U／mL)1.00mE、H202栽培基質(zhì)液2.00mL，25℃水浴反映30min后馬上添加1.5mL鹽酸停止反映，加碘酸鉀5mL，60℃水浴加熱40min，制冷，加木薯淀粉3mL，滴定劑，以純凈水作參比液，在光波長(zhǎng)600nm處測(cè)OD值A(chǔ)，與此同時(shí)進(jìn)行酶試劑空白OD值A(chǔ)₀測(cè)量，依據(jù)△A(△A=A₀一A)明確過氧化氫酶活力E。其他情況不會(huì)改變，只更改反應(yīng)速度，測(cè)量5～70min內(nèi)A值(圖3)。30min內(nèi)OD值與時(shí)間有線性相關(guān)。不難看出，H₂O₂空氣氧化KI具備零級(jí)反應(yīng)的特性，生成物初始濃度值立即影響了反應(yīng)速率，40min后反映徹底。因此顯色反應(yīng)時(shí)間確認(rèn)為40min。

6、酶促反應(yīng)時(shí)間危害

取過氧化氫酶切削液10.00mL作檢測(cè)液，其他情況不會(huì)改變，更改酶促反應(yīng)時(shí)間，測(cè)量△Ao以時(shí)間t為橫坐標(biāo)軸，△A為縱軸作酶促反應(yīng)曲線圖。由圖4得知：在反映原始環(huán)節(jié)的0～30min內(nèi)，In△A與時(shí)長(zhǎng)正相關(guān)，合乎酶促催化反應(yīng)一級(jí)反應(yīng)特點(diǎn)。30min后，△A趨向穩(wěn)定。因而，明確酶促反應(yīng)時(shí)間為30min。

7、工作中曲線圖

取過氧化氫酶標(biāo)液0.00—20.00mL作檢測(cè)液，在最好情況下進(jìn)行△A測(cè)量，制作工作中曲線圖(圖5)。過氧化氫酶魅力E(U／mL)在0.002～0.04U／mL范疇內(nèi)與△A呈優(yōu)良的線性相關(guān)：△A=0.06843 16.9866E(U／mL)，r=0.9970。按實(shí)驗(yàn)方法平行測(cè)定空缺10次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差s為0.01，檢出限為0.0018U／mL，最少檢測(cè)量做到0.15U。

8、影響實(shí)驗(yàn)

取10.00mL過氧化氫酶標(biāo)液作檢測(cè)液，依照實(shí)驗(yàn)方式調(diào)查生物組織并存氧化性化學(xué)物質(zhì)影響狀況。結(jié)果發(fā)覺，2倍于基底液濃度值的葡萄糖水、葡萄糖、乳清蛋白、半乳糖不危害酶比活度測(cè)量，數(shù)據(jù)誤差低于5％。

9、試品剖析

H₂O₂是蛋白質(zhì)食物細(xì)胞的新陳代謝正中間物質(zhì)，因此肝部中有著較多的CAT，試驗(yàn)選擇魚肝部CAT萃取液做剖析。將購(gòu)買鮮魚殺掉，脫離肝部，用過濾紙吸走，秤重，按1:10(w／V)添加1～4℃冷0.25mol／L綿白糖液，勻漿，1500r／min下離心式5min，取上清液，用0.25mol／L綿白糖稀釋液50倍，制取酶粗液，1～4℃自然環(huán)境中儲(chǔ)存。取酶粗液1.00mL進(jìn)行活力測(cè)量，平行面六次，測(cè)算均值和相對(duì)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)算利用率。

利用率操縱在96％～105％范疇內(nèi)，表明粗酶液并存化學(xué)物質(zhì)不危害酶促反應(yīng)測(cè)量；依據(jù)測(cè)量結(jié)果可計(jì)算出來魚肝CAT成分各自為550U／g(鯽魚)和537U／g(鯉魚)。